黄曲霉毒素检测方法
【简介】
黄曲霉毒素(Aflatoxins)可以有曲霉菌、黄曲霉、寄生曲霉、集封曲霉和伪溜曲霉4种真菌产生,是一组化学结构类似的二呋喃香豆素的衍生化合物,中药在贮藏、制备、运输过程中如保存不当有受潮霉变而污染黄曲霉毒素的可能。黄曲霉毒素是一种毒性极强的剧毒物质,对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。
【生存环境】
黄曲霉毒素是生长在食物及饲料中的黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强。
黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果,特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般在热带和亚热带地区,食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。
【物理性质】
在紫外线下黄曲霉毒素B1、B2发蓝色荧光黄曲霉毒素G1、G2发绿色荧光。其纯品为无色结晶,耐高温黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性。
黄曲霉毒素的相对分子量为312-346,难溶于水易溶于油,甲醇丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚己烷和乙醚中。一般在中性溶液中较稳定,但在强酸性溶液中稍有分解在pH9-10的强碱溶液中分解迅速。
【化学结构】
黄曲霉毒素CAS号 1402-68-2,是一组化学结构类似的化合物,目前已分离鉴定出12种包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2a和毒醇。黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物.即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)。
前者为基本毒性结构,后者与致癌有关。M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物。黄曲霉毒素的主要分子型式含 B1、B2、M1、M2、G1、G2等.其中M1和M2 主要存在于牛奶中。B1为毒性及致癌性最强的物质。
【黄曲霉毒素辨别方法】
发霉的花生、核桃等都容易产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是很苦的,食用花生、核桃等食物时如果感觉很苦,立即吐出来,并漱口。
要检测是否地沟油的最简单方法是:在炒菜时放一颗剥皮的蒜头,蒜头对于黄曲霉素最敏感。如果蒜头变红色,就是用地沟油,含有大量黄曲霉毒素。食油良好的话,蒜头是白色的。
比较科学的方法还是下面详细介绍的黄曲霉毒素检测方法。
【黄曲霉毒素检测方法】
黄曲霉毒素检测方法从最初以薄层层析法为主,发展到高效液相色谱法、微柱法、酶联免疫吸附法等多种普遍应用,其进展与新的化学检测手段和新仪器的出现密不可分。这些新方法、新手段的快速应用,为黄曲霉毒素的检测分析提供了更广泛的选择余地,适应了不同的检测目的和要求。
1、黄曲霉毒素检测方法---薄层色谱法(TLC) :TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法,是我国测定食品及饲料中AFTB1的标准方法之一(GB/T5009.23—1996)
2、黄曲霉毒素检测方法---高效液相色譜法(HPLC) :HPLC是近几年发展起来的检测AFTB1方法,主要是用荧光检测器检测,在适宜的流动相条件下,采用反相C18柱,使多种黄曲霉毒素同时分离。高效液相色谱法灵敏、分辨率高,可作定性、定量分析,同时可检测多个黄曲霉毒素种类,适于大批量样品的分析。
3、黄曲霉毒素检测方法---微柱法 :微柱筛选法测定黄曲霉毒素,主要是用来检验黄曲霉毒素的存在与否以及快速筛选出超标样品。微柱筛选法是将样品提取液通过由氧化铝与硅镁吸附剂组成的微柱层析管,杂质被氧化铝吸附,黄曲霉毒素被硅镁吸附剂吸附,在365 nm紫外线下呈蓝紫色荧光,其荧光强度在一定范围内与黄曲霉毒素的含量成正比,由于微柱不能分离黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2,故检测结果为黄曲霉毒素的总量。
4、黄曲霉毒素检测方法---酶联吸附法(ELISA):ELISA是利用免疫、酶和生化技术来检测AFT。ELISA以其简便、快速、灵敏、成本低、检测谱广等特点在检测方面越来越受到人们的青睐,是一种定性或半定量的方法。
5、黄曲霉毒素检测方法---金标免疫层析检测技术(GICA) :GICA利用纳米金作为标记物,在很短的时间内就能测出待测物的含量,并可以直接读取结果。不需要分离纯化样品,也无需对检测溶剂做任何的处理,真正做到一步检测,方便、高效。
黄曲霉毒素检测方法除此之外还有放射免疫法和亲合层析法等多种检测方法,苏州快捷康生物技术有限公司生产的黄曲霉毒素B1检测卡和黄曲霉毒素M1检测卡就是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。黄曲霉毒素 B1试剂盒和黄曲霉毒素M1试剂盒均采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物黄曲霉毒素B1\M1和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉毒素B1\M1抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1\M1的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应残留物黄曲霉毒素B1\M1的含量。
在上述黄曲霉毒素检测方法中,酶联免疫吸附法是目前检测黄曲霉毒素B1最实用的方法。由于抗原抗体之间的特异性反应,定性、定量分析同时完成,简化了反复纯化、分离的前处理过程。所以酶联免疫吸附法检测黄曲霉毒素是一个准确性高,安全性、实用性强的检测技术。
【黄曲霉毒素的危害】
黄曲霉毒素对人和动物健康的危害均与黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成有关,黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构是产生毒性的重要结构,研究表明黄曲霉毒素的细胞毒作用可干扰信息RNA和DNA的合成,进而干扰细胞蛋白质的合成,导致动物全身性损害。
黄曲霉毒素对人类健康的危害主要是由于人们食用被黄曲霉毒素污染的食物,途径有二,其一是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物摄入,其二是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。食物中黄曲霉毒素与肝细胞癌变(Liver Cell Cancer,LCC)呈正相关性,长时间食用含低浓度黄曲霉毒素的食物被认为是导致肝癌、胃癌、肠癌等疾病的主要原因。
【中毒症状】
1、人中毒前驱表现为发烧、腹痛、呕吐、食欲减退等。
2、2~3周后很快发生中毒性肝病表现:肝脏肿大,肝区疼痛,黄疸、脾大。腹水,下肢浮肿及肝功能异常。
3、可有心脏扩大,肺水肿,甚至痉挛、昏迷等,多数患者在死前可有胃肠道大出血表现。
4、关于动物临床毒性研究表明,给动物喂食含黄曲霉毒素的饲料后,表现为浙进性食欲减退、口渴、便血、生长缓慢、体重减轻、皮肤出血、过度兴奋、黄殖、抽搐、角弓反张等。病理解剖可见肝脏弥漫性充血、出血利坏死等表现。
【预防措施】
预防黄曲霉毒素危害人类健康的主要措施是防止食品受黄曲霉菌及其毒素的污染,并尽量减少黄曲霉毒素随同食品摄入人体的可能。具体措施如下:
1、加强饲料保管,防止饲料发霉,尤其是多雨季节。
2、食品防霉:控制粮粒的水分,注意低温保藏和通风。
3、去除毒素:主要是用物理、化学或生物学方法将毒素去除,或者采用各种方法来破坏毒素。
4、制定食品中黄曲霉毒素最高允许量标准。如我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准如下:玉米、花生仁、花生油不得超过20μg/kg;大米、其它食用油不得超过10μg/kg;其它粮食、豆类、发酵食品不得超过5μg/kg;婴幼儿奶粉及婴儿代乳食品不得检出。
【相关事件】
2011年12月26日,蒙牛副总裁卢建军解释称,“黄曲霉素是因为眉山地处四川,多阴雨天气,个别供方对饲料管理不当,霉变导致牛奶产生黄曲霉素。此前国家质量监督检验检疫总局公布了对全国液体乳产品进行抽检结果的公告,一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。
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