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苏州快捷康生物技术有限公司

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猪瘟抗原检测

2015/3/30 8:42:44点击:

【简介】

猪瘟抗原检测猪瘟病毒(CSFV),或称猪霍乱,由于其高度的致病性和可引起广泛的死亡,给养猪业造成严重的经济损失。感染了高致病力CSFV毒株的猪在表现临床症状之前就可排出大量病毒。

急性或者亚急性感染耐过的猪产生抗体,不再传播病毒。中等毒力、低致病性的毒株可导致慢性感染,这种猪可以持续性地或者间歇性地排出病毒直到死亡。先天性的感染可以导致流产、木乃伊胎、死胎和弱胎、或者胚胎畸形。

【猪瘟抗原检测】

猪瘟抗原检测中免疫荧光试验主要用于检测病毒抗原,是目前国内外实验室诊断猪瘟的最常用方法,结果直观、可靠。特别是在疫情初起必须查清病原、检疫及以猪场猪瘟净化时,此种检测方法尤为重要。

进行免疫荧光试验时,将待检病猪的扁桃体、肾脏、淋巴结、脾脏等组织的冰冻切片或抹片,或待检细胞培养片,经丙酮固定后,滴加猪瘟荧光抗体覆盖于切片、抹片或细胞片表面,置37℃作用30min,然后用磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.2,0.01mol/L)洗涤,自然干燥后置荧光显微镜下观察。必要时,设立抑制试验染色片,以鉴定荧光的特异性。

在荧光显微镜下,见切片、抹片或细胞培养物(细胞盖片)中有胞浆荧光,并由抑制试验证明为特异性荧光,判为猪瘟阳性反应;无荧光判为阴性反应。

反转录--聚合酶链式反应(RT-PCR)方法通过检测病毒核酸而确定病毒存在,是一种特异、敏感、快速的方法。在RT-PCR扩增的特定基因片段的基础上,进行基因序列测定,将获得的基因信息与我国猪瘟分子流行病学数据库进行比较分析,可进一步鉴定流行毒株的基因型,从而追踪流行毒株的传播来源或预测预报新的流行毒株。一般来说套式RT-PCR方法是检测瘟病毒更敏感的方法,但其缺点是比较费时。不适用于大量样品的检测。

对猪瘟抗原检测,快捷康生物的猪瘟抗原检测卡采用胶体金免疫层析技术,在玻璃纤维纸上预包被金标记鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体(Au-Ab1),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体(Ab2)和羊抗鼠IgG。

检测样品为阳性时,样品中的猪瘟病毒抗原(Ag)可与包被在试纸条前端的胶体金标记的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体(Au-Ab1)结合,形成免疫复合物,由于层析作用,复合物沿膜带向前移动,经过检测线时与预包被的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体(Ab2)形成“Au-Ab1-Ag-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色,游离金标记抗体在对照线处与羊抗鼠IgG体结合而富集显色。

阴性样品则仅在对照线处显色。检测时只需将血清/血浆/全血加在检测卡的加样孔内,操作简便、快速,结果直观、准确,灵敏度高,容易判定。

【抗原与抗体】

根据研究,猪瘟抗原抗体之间存在一定的微妙关系。同一头猪同一时间可能存在强毒抗原(即带毒)。但不一定存在强毒抗体.存在强毒抗体时不一定存在强毒抗原。我们曾用5株猪瘟野毒人工接种14头健康猪,用猪瘟荧光抗体法跟踪其抗原。并用猪瘟单抗酶联试验法跟踪其强毒抗体。

结果发现,从接种后第7天便从绝大多数猪的扁桃体检测到猪瘟病毒,从第2周开始直至死亡(4—6周左右)均检测到很强的阳性,个别到10—12周试验结束仍为强阳性,但其强毒抗体水平上升非常缓慢。至4—6周死亡,甚至到10—12周试验结束仍未达到阳性标准。国外有关报道与此类似,认为猪感染猪瘟病毒后。从潜伏期开始直到死亡均能检测到猪瘟病毒抗原,只有等到耐过并康复开始抗原才有望消失并逐渐生成抗体。

 抗体检测最常用的检测猪瘟病毒抗体的方法多以病毒中和试验为基础。目前已建立数个特异的检测血清抗体的E LlSA方法。包括检测针对粗蛋白、特异结构蛋白如E2、E rns以及非结构蛋白NS3抗体的方法。

【试剂盒的特点】

猪瘟病毒抗原(CSFV-Ag)elisa试剂盒特点:

1、高效、灵敏、特异的抗体;   

2、稳定的重复性和可靠性;  

3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;  

4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;

5、节省实验经费。

【防治方法】

做好平时的预防工作:做好猪瘟的预防注射工作,是防止猪瘟发生的关键措施。每年采取定期注射和适时补针相结合的办法,用猪瘟兔化弱毒冻干苗,稀释后大小猪一律肌肉注射1毫升。注射后第4天即可产生免疫力,免疫期可达1年以上。选择适合本场的免疫程序。

实行自繁自养的办法:若需要从外地购买猪种,运回后还须隔离饲养半个月左右,并进行疫苗注射,进行实验室猪瘟抗原检测阴性,方可混群饲养。

加强集市管理和运输检疫:杜绝病猪在集市出售和收购、运输,以防传播疫病。生猪交易市场、猪库、屠宰场等猪只集中场所,特别应加强兽医卫生管理及检疫措施。

改善饲管理:改善饲养管理,搞好圈舍、环境及管理用具的兽医卫生、消毒工作。